Методы исследования почва на гельминтов

Подготовка к отбору проб. Отбор проб для паразитологических анализов проводят не менее 1 раза в год для оценки качественного состояния почв естественного и нарушенного сложения.

Для аналогичных исследований почв детских, лечебно-профилактических учреждений и зон отдыха отбор проб проводят не менее 2 раз в год – весной и осенью.

При изучении динамики самоочищения от яиц гельминтов, цист кишечных простейших отбор проб проводят в течение первого месяца еженедельно, а затем ежемесячно в течение вегетационного периода до завершения активной фазы самоочищения.

Для оценки качества по паразитологическим показателям почв сельскохозяйственных угодий, в зависимости от характера источника загрязнения, возделываемой культуры и рельефа местности на каждые 0,5 – 20,0 га территории закладывают не менее 1 пробной площадки размером 10 х 10 м; на территории расположения детских и лечебно-профилактических учреждений, игровых площадок, выгребов, мусорных ящиков и других объектов, занимающих небольшие площади, размер пробной площадки должен быть не более 5 х 5 м.

Отбор проб почвы. Точечные пробы отбирают в соответствии с МУ 2.1.7.730-99 на модельной площадке из одного или нескольких слоев или горизонтов методом конверта, по диагонали или любым другим способом с таким расчетом, чтобы каждая проба представляла собой часть почвы, типичной для генетических горизонтов или слоев данного типа.

Точечные пробы отбирают ножом, совком или шпателем из прикопок или почвенным буром Некрасова. Объединенную пробу составляют путем смешивания точечных проб, отобранных на одной пробной площадке.

Для паразитологического анализа с каждой пробной площадки берут одну объединенную пробу массой 200 г, составленную из 10 точечных проб массой 20 г каждая, отобранных послойно с поверхности и глубины 10 – 20 см. При необходимости отбор проб проводят из более глубоких (40 – 60 см) слоев почвы послойно.

Пробы помещают в банки с крышками или пакеты из клеенки, пластика, этикетируют с указанием места отбора, даты, глубины, характера исследуемого участка (в тени или на солнце, состав почвы, наличие растительности и т.д.). Все объединенные пробы должны быть зарегистрированы в журнале, пронумерованы.

В процессе транспортирования и хранения почвенных проб должны быть приняты меры по предупреждению возможности их загрязнения.

Паразитологический анализ проб почвы проводят в день доставки их в лабораторию. При невозможности немедленного проведения исследований пробы почвы хранят в холодильнике при температуре до 5 °С. Для исследования на цисты кишечных патогенных простейших почву без обработки хранят не более 2 суток; на яйца биогельминтов – до 7 суток, а на яйца геогельминтов – не более 1 месяца.

Для предотвращения высыхания и развития личинок в яйцах геогельминтов почву увлажняют и аэрируют один раз в неделю, для чего пробы вынимают из холодильника и оставляют на 3 часа при комнатной температуре, увлажняют водой по мере потери влаги и снова помещают для хранения в холодильник.

При необходимости хранения проб почвы более месяца применяют консервирующие средства: почву пересыпают в кристаллизатор, заливают раствором формалина с массовой долей 3%, приготовленным на изотоническом растворе натрия хлористого с массовой долей 0,85% (жидкость Барбагалло), или раствором соляной кислоты с массовой долей 3%, а затем ставят в холодильник.

Подготовка проб почвы к анализу. Пробы почвы в лаборатории рассыпают на бумаге или кальке и разминают пестиком крупные комки. Затем из нее выбирают корни растений, камни, насекомых, стекло, уголь, кости животных, друзы гипса, известковые журавчики и др.

Затем почву переносят в ступку, растирают пестиком и просеивают через сито с ячейками диаметром 1 мм.

6.1.1. Метод исследования почвы на яйца гельминтов по Романенко Н.А. (1996)

ПОПРАВОЧНЫЕ КОЭФФИЦИЕНТЫ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИСТИННОЙ ОБСЕМЕНЕННОСТИ ПОЧВ ЯЙЦАМИ АСКАРИД И ВЛАСОГЛАВОВ

Тип почвыЯйца геогельминтов
аскаридвласоглавов
Дерново-подзолистая (супесь)1,231,43
Дерново-подзолистая (суглинок)1,451,50
Торфяно-глоевые1,842,40
Чернозем обыкновенный1,601,85
Чернозем типичный1,702,30
Чернозем выщелоченный1,432,10
Чернозем каштановый (супесь)1,281,95
Чернозем каштановый (суглинок)1,642,15
Аллювиально-лугово-лесная1,371,65
Сероземы1,391,60
Черноземная лесная коричневая1,491,71
Горная лесная бурая1,541,72
Желтоземы1,791,94

Для обнаружения в почве яиц гельминтов, имеющих более высокую плотность (яйца описторхисов, клонорхисов), чем яйца аскарид и власоглавов, следует использовать насыщенный раствор хлорида цинка (плотность 1,78); яйца токсокар лучше выявляются при обработке почвы насыщенным раствором сульфата цинка или сульфата магния в смеси с 5%-ным раствором йодата калия.

Примечание. При работе по данной методике необходимо строго соблюдать следующие требования:

1. Обязательность применения обезжиренных предметных стекол.

2. Обязательность контроля плотности насыщенного раствора с помощью ареометра (плотность должна быть не ниже 1,38 – 1,40).

В случае нарушения указанных требований в первом случае поверхностная пленка с яйцами гельминтов не прилипнет к стеклу, во втором случае скорость всплывания яиц гельминтов замедлится и в указанные сроки они не достигнут поверхностной пленки.

Для эффективного использования рабочего времени исследователя рекомендуется: во время первого отстаивания смеси “почва с щелочью” проводить подготовку предметных и покровных стекол, запись в журнале; во время второго – “почвы с насыщенным раствором соли” – подготовку рабочего места для микроскопирования, уборку центрифуги и другого лабораторного оборудования.

После окончания проведения анализов использованную посуду (центрифужные пробирки, предметные и покровные стекла, стеклянные палочки) замачивают в стиральном порошке и кипятят 15 – 20 минут, затем моют в чистой воде.

Пробирки хранят в штативах, предметные и покровные стекла в широкогорлых банках с пробками, заполненных смесью Никифорова или нашатырным спиртом. Перед использованием предметные и покровные стекла не вытирают, а подсушивают.

6.1.2. Метод исследования почвы на личинки гельминтов по Берману

Ход исследования. Из объединенной пробы берут 20 г почвы и помещают на металлическую сетку (или ситечко для молока), которую устанавливают в аппарат Бермана.

Последний представляет собой стеклянную воронку (диаметром 10 – 15 см), соединенную при помощи резиновой трубки с узкой пробиркой.

Систему устанавливают в штатив, наполняют теплой (температура 45 – 50 °С) водой, а затем металлическую сетку с почвой помещают в воронку так, чтобы нижняя часть ее соприкасалась с водой.

Воронку с почвой ставят в термостат при температуре 37 °С. Личинки гельминтов, обладая термотропностью, мигрируют из почвы через сито в теплую воду и оседают на дно пробирки.

Через 3 – 4 часа осторожно отсоединяют пробирку от воронки, сливают верхний слой жидкости, а осадок переносят на предметное стекло и микроскопируют.

Но лучше содержимое пробирки центрифугировать, а после этого исследовать осадок.

Метод Супряги

В химический стаканчик помещают 10 г почвы, заливают теплым (40 °С) физраствором так, чтобы он полностью покрывал пробу. Через 20 минут жидкость сливают в чашку Петри и исследуют под бинокулярным микроскопом МБС. По эффективности метод Супряги не уступает методу Бермана.

Для отличия личинок свободноживущих нематод от паразитических применяют метод Корта. Принцип его заключается в воздействии на личинок нематод формалином. При этом личинки свободноживущих нематод погибают быстрее, чем паразитические. Личинки помещают в воду в чашку Петри или на часовое стекло.

При добавлении 40%-ного раствора формалина к жидкости с личинками нематод в соотношении 1:5 личинки свободноживущих нематод гибнут через 5 – 8 минут, а паразитические – остаются живыми в течение 15 – 20 минут, но подвижность их замедляется; при добавлении формалина в соотношении 1:25 первые гибнут через 12 минут, тогда как вторые в 95% случаев остаются нормально подвижны.

6.1.3. Метод исследования почвы на цисты кишечных простейших по Падченко И.К. (1992)

Ход исследования. Из объединенной пробы берут 25 г почвы, помещают в фаянсовую ступку, постепенно добавляют к ней водопроводную воду, тщательно растирают пестиком до гомогенной кашицы и выливают ее в цилиндр емкостью 1 л, предварительно наполненный на 3/4 объема чистой водой. Смесь размешивают стеклянной палочкой и отстаивают в течение 15 минут.

Образовавшуюся на поверхности смеси пленку удаляют петлей, а жидкую часть ее отсасывают сифоном в чистый цилиндр. Осадок повторно промывают (не менее 3 раз), собирая промывные воды в одном цилиндре.

Промывные воды отстаивают, через 24 часа надосадочную жидкость удаляют сифоном, а осадок исследуют в нативных мазках и окрашенных раствором Люголя препаратах. С этой целью осадок тщательно встряхивают и одну каплю полученной взвеси наносят пастеровской пипеткой на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под световым микроскопом.

Микроскопируют не менее 1 мл осадка с последующим пересчетом на его общий объем. Анализ осадка проводят в течение первых 2 – 3 суток после его получения.

Для того, чтобы осадок длительное время оставался пригодным к исследованию (до 2 месяцев), к нему добавляют консервант, содержащий мертиолят, 40%-ный раствор формалина, спирт этиловый 96° и физиологический раствор (соотношение компонентов в %: мертиолят – 0,0016 – 0,0018, 40%-ный формалин – 4,1 – 4,4; спирт этиловый 96° – 10,4 – 10,9; физиологический раствор – остальное). Консервант добавляют к осадку в соотношении 1:2 и хранят в холодильнике.

Для приготовления мазков каплю исследованной смеси осадка с консервантом после встряхивания наносят пипеткой на предметное стекло, смешивают ее с каплей акридинового оранжевого, разведенного 1:500, накрывают покровным стеклом и исследуют под световым или люминесцентным микроскопом, подсчитывают число неокрашенных (живых) и окрашенных (мертвых и дегенерирующих) цист кишечных простейших каждого вида. При изучении исследуемого материала под световым микроскопом жизнеспособные цисты кишечных простейших остаются неокрашенными, а дегенерирующие и мертвые цисты окрашиваются в желтый цвет. Погибшие цисты под люминесцентным микроскопом красные.

Источник: https://zakonbase.ru/content/part/619860?print=1

Способ обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы

Методы исследования почва на гельминтов

Изобретение относится к области профилактической медицины и санитарной паразитологии, экологии человека и может быть использовано как экспресс-способ для обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы.

Геогельминты – гельминты, передающиеся через почву, являются наиболее распространенными паразитами в мире.

Заболеваемость геогельминтозами, по оценкам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), более одного миллиарда жителей нашей планеты (Acceleratingworktoovercometheg-lobalimpactofneglectedtropicaldiseases. A roadmap for implementation. Executive summary. \\WorldHealthOrganization, 2012, p. 12).

Геогельминты -Ascaris lumbricoides, Ascaris suum, Toxocara canis встречаются практически повсеместно не только в местностях, характеризующихся плохими санитарными условиями, но и очень часто в благополучных мегаполисах в песке на детских площадках и в песочницах.

Наиболее подверженная группа риска заражения геогельминтами – дети.

В современных условиях необходимы быстрые – экспресс способы обнаружения яиц геогельминтов для проведения профилактических мероприятий и постоянного мониторинга за очагами геогельминтозов и факторами риска распространения инвазий и эпидемиологически значимыми объектами мегаполисов, растениеводческих хозяйств и пищевой промышленности, а также за объектами питьевого и хозяйственного водоснабжения (SingerBH, CastroMC (2007) Bridgestosustainabletropicalhealth. \\ProcNatlAcadSciUSA 104: 16038-16043).

Существующие на сегодняшний день способы санитарно-гельминтологического исследования почвы трудоемки и требуют значительного времени (3-3,5 часа, включая пробоподготовку) для проведения исследований, кроме того, проведение таких исследований возможно только в специализированных лабораториях.

Все известные способы основаны на применении различных флотационных растворов. Для обнаружения яиц гельминтов в почве используется комбинированный способ Романенко, где в качестве флотационного раствора используется насыщенный раствор нитрата натрия (Романенко НА., Падченко И.К., Чебышев Н.В.

Санитарная паразитология. – М.: Медицина, 2000, стр. 231 -275). Для исследования по способу Романенко отбирают 25 г почвы, помещают в центрифужную пробирку вместимостью 250 мл и заливают 150 мл воды. Смесь тщательно размешивают стеклянной палочкой в течение 5 мин или с помощью электромешалки 1 мин.

Всплывшие крупные частицы сразу же удаляют. После центрифугирования в течение 3 мин при 800-1000 об/мин воду сливают, а в пробирки добавляют 150 мл насыщенного раствора нитрата натрия. Перемешивают палочкой и вновь центрифугируют 3 мин.

Пробирки устанавливают в штатив, доливают тем же раствором до образования выпуклого мениска, накрывают обезжиренным предметным стеклом так, чтобы оно касалось слоя жидкости.

Через 15 мин предметное стекло снимают, на влажную поверхность добавляют несколько капель 50% водного раствора глицерина и микроскопируют.

С целью повышения эффективности выявления яиц рекомендуется снятие препарата повторить 2-3 раза.

Основными недостатками данного метода являются:

– насыщенный раствор нитрата натрия, а также другие альтернативные растворы, такие как растворы тиосульфата натрия и натриевой селитры, очень быстро кристаллизуются, что затрудняет просмотр проб и снижает вероятность выявление яиц гельминтов;

– применение нескольких последовательных промывок приводит к потери исследуемого материала, что в свою очередь влияет на точность определения количества яиц геогельминтов в пробе почвы;

– значительное время на подготовку флотационного раствора и проведение исследования образца почвы на наличие гельминтов 3-3,5 часа.

Прототипом данного способа является «Способ выявления яиц гельминтов, клещей и ооцист простейших в пробах почвы» (патент РФ №2466388):

Способ выявления яиц гельминтов, клещей и ооцист простейших в пробах почвы заключается в том, что пробу почвы весом 25 г помещают в центрифужную пробирку вместимостью 250 мл и заливают 150 мл воды, смесь тщательно размешивают стеклянной палочкой в течение 5 мин или с помощью электромешалки 1 мин и центрифугируют в течение 3 мин при 800-1000 об/мин, воду сливают, а в пробирки добавляют 150 мл трехкомпонентной флотационной системы, состоящей из насыщенных растворов цинка хлорида (2 кг ZnCl2 на 1 л), натрия хлорида (0,42 кг NaCl на 1 л) и глицерина, взятых в соотношении 1:1:1, в пробирку доливают тот же раствор до образования выпуклого мениска, пробирку накрывают обезжиренным предметным стеклом так, чтобы оно касалось слоя жидкости, через 20-30 мин стекло снимают и микроскопируют, снятие препарата рекомендуется повторить 2-3 раза.

Основными недостатками данного способа являются:

– использование сложного флотационного раствора;

– быстрая кристаллизация флотационного раствора;

– потеря исследуемого материала при центрифугировании и удаления раствора;

– значительное (2-2,5 часа) время на исследование.

Задача изобретения – повышение точности определения яиц гельминтов в пробах почвы (за счет избавления от кристаллизации флотационного раствора и уменьшения потери исследуемого материала путем исключения последовательных промывок), снижение трудоемкости процесса и значительное уменьшение (до 30-35 мин) времени обнаружения яиц гельминтов в исследуемых образцах почвы.

Поставленная задача решается способом обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы, включающим смешивание исследуемого образца почвы с флотационным раствором и последующее микроскопирование, отличающимся тем, что в качестве флотационного раствора используют 25 мл 1,4-1,6% раствора перекиси водорода на 25 г пробы почвы.

Практически способ осуществляют следующим образом. К 25 г образца почвы, помещенного в большую центрифужную пробирку, добавляют 25 мл 1,4-1,6% перекиси водорода. Содержимое перемешивают маленькими стеклянными палочками и отстаивают в течение 4-6 минут. Перемешивание повторяют дважды. Затем пробирку оставляют отстаиваться на 20-25 минут.

В процессе реагирования почвы и перекиси водорода почва поднимается выше уровня жидкости и оседает на стенках пробирки. Ее смывают небольшим количеством раствора перекиси водорода, также смывают частички почвы с палочки, которую используют для перемешивания образца, с целью недопущения возможных потерь в пробе.

В процессе отстаивания на линии соприкосновения перекиси водорода с верхней границей образца почвы формируется зона, отличающаяся по цвету от основной массы исследуемого образца, из которой пипеткой забирается материал для микроскопирования на предметном стекле.

Для обнаружения яиц геогельминтов, которые могут находиться в образце, необходимо микроскопировать не более трех предметных стекол. Полученные препараты просматривают под увеличением ×40, для удобства просмотра можно добавить раствор Люголя.

Предлагаемый способ обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы позволяет в 98% случаев в 2-2,5 раза быстрее по сравнению с используемыми на сегодняшний день способами обнаружить яйца геогельминтов.

Основой предлагаемого способа является способность перекиси водорода в определенной концентрации взаимодействовать с частичками почвы исследуемого образца и поднимать вверх яйца гельминтов. Подбор концентрации раствора перекиси водорода был определен экспериментальным способом. Его результаты представлены в табл. 1.

Таблица 1
Концентрация перекиси водородаНедостаткиПреимущества
3-4%Слишком активное взаимодействие с почвой, отчего появляется много пузырьков воздуха, мешающих просмотру образца под микроскопомОчень быстро поднимает частички почвы и яйца гельминтов к поверхности
1,4-1,6%Не выявленоОптимальная концентрация для просмотра препаратов почвы с яйцами геогельминтов
1,0-1,4%Недостаточная концентрация для подъема яиц геогельминтов над основным пластом почвыОтсутствуют
0,5-1,0%Недостаточная концентрация для подъема яиц геогельминтов над основным пластом почвыОтсутствуют

Были проведены по 100 испытаний с образцами почвы и песка. Авторами проведены сравнительные исследования заявленного способа со способом Романенко (табл. 2).

Таблица 2
Способ РоманенкоПатентуемый способ
Время пробоподготовки и проведения исследований180-210 минут30-35 минут
Необходимые реагентыГидроксид натрия (NaOH), Нитрат натрия (NaNO3)Перекись водорода (Н2O2)
Среднее количество выявляемых яиц (в 100 опытах)4,48,6

Пример 1. Проба песка общей массой 300 г. Забор пробы осуществлялся в соответствии со способом Романенко.

При исследовании способом Романенко яиц гельминтов не было выявлено.

Применение заявленного способа позволило выявить яйца Тохосаrasp.и Trichuristrichiura.

Пример 2. Проба почвы общей массой 200 г. Забор пробы осуществлялся в соответствии со способом Романенко.

При исследовании методом Романенко яиц гельминтов не выявлено.

По предлагаемому способу при исследования почвы выявлено яйцо Toxocarasp.

Таблица 3
Сравнительная эффективность выявления яиц геогельминтов в пробах почвы
Определение числа яиц геогельминтов в пробе
№ пробы почвыСпособ РоманенкоСпособ, представленный в патенте РФ №2466388Патентуемый способ
1257
2369
3236
4325
51712
6236
7347
8235
9134
10254

Из представленных данных следует, что предлагаемый способ обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы позволяет повысить точность определения яиц гельминтов в пробах почвы, снизить трудоёмкость процесса и значительно уменьшить (до 30-35 мин) время обнаружения яиц гельминтов в исследуемых образцах почвы.

Это позволяет использовать предлагаемый способ как для проведения санитарно-паразитологических исследований, так и для проведения научных исследований.

Источник: https://edrid.ru/rid/216.013.998e.html

Санитарно-гельминтологические исследования

Методы исследования почва на гельминтов

При помощи санитарно-гельминтологических исследований обнаруживают яйца и личинки гельминтов в окружающей среде, определяют видовой, количественный состав, их жизнеспособность.

Исследование почвы на яйца гельминтов. Пробы почвы массой 100— 300 г отбирают на глубине 10—60 см вблизи выгребов, мусорных ящиков, на детских площадках и т. д. Заливают их 0,85% водным раствором натрия хлорида или 3% жидкостью Барбагалло и хранят до исследования в бытовом холодильнике. Срок хранения проб — не более 1 мес.

Исследуют почву по методу Романенко (1968, 1982): 25 г почвы помещают в центрифужные пробирки объемом 250 мл, приливают 3% раствор натриевого или калиевого основания в соотношении 1:1. Полученную смесь тщательно размешивают, отстаивают в течение 20— 30 мин, после чего центрифугируют 5 мин при 800 об/мин.

Надосадочную жидкость удаляют, а осадок промывают 1—5 раз до получения прозрачной надосадочной жидкости.

Затем к осадку добавляют 150 мл насыщенного раствора азотнокислого натрия (относительная плотность — 1,38—1,40), тщательно размешивают и центрифугируют, после чего в каждую пробирку добавляют тот же раствор до уровня на 2—3 мм ниже их краев.

Пробирки накрывают предметным стеклом так, чтобы оставался зазор шириной не более 10 мм, через который пипеткой добавляют раствор азотнокислого натрия до соприкосновения его с нижней поверхностью предметного стекла.

Затем осторожно полностью закрывают предметным стеклом пробирку и после 20—25-минутного отстаивания стекло снимают и переворачивают его нижней поверхностью вверх. На место снятого стекла ставится второе, а при необходимости — и третье. На снятые стекла наносится капля 50% раствора глицерина, накрывается покровным стеклом и микроскопируется под световым микроскопом. Можно исследовать поверхностную пленку непосредственно в центрифужной пробирке под бинокулярным микроскопом МБС (Н. Л. Чекина, 1977).

На личинки гельминтов почву исследуют по методу Бермана.
Исследование воды на яйца гельминтов.

Пробу воды отбирают и* водоемов в количестве от 0,5 до 10 л, что зависит от степени ее загрязнения, а из колодцев — от 20 до 25 л. Рекомендуется отбирать воду по« 0,5 — 1 л через каждые 3—5 мни.

Содержащиеся в воде яйца концентрируют путем осаждения или фильтрации при помощи мембранных, бумажных или тканевых фильтров. Анализ воды осуществляют по методу Васильковой.

Исследование сточных вод на яйца гельминтов. Пробы сточной воды в условиях малых очистных сооружений отбирают на следующих этапах ее очистки: до поступления на очистные сооружения («сырая» вода), в отстойной части установки, контактном резервуаре, при впадении в биоируд или открытый водоем.

На централизованных очистных: сооружениях воду отбирают до поступления на очистные сооружения,, после механической очистки, после вторичных отстойников, биологических прудов, полей фильтрации, земледельческих полей орошения. «Сырую» воду исследуют в количестве от 2 до 5 л, а в процессе искусственной биологической очистки и после завершения ее — от 10 до 15 л.

Пробы отбирают через каждый час в течение суток (среднесуточная) или с 7 до 20 ч (среднедневная). Исследуют сточную воду по методу Романенко. Сточную воду наливают в стеклянный цилиндр емкостью 1—2 л, добавляют один из коагулянтов (сернокислые алюминий, железо или медь) в дозе 0,3—0,5 г/л и тщательно размешивают.

Спустя 40—50 мин осветленную надосадочную жидкость удаляют сифоном, а осадок переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют в течение 3 мин при 1000 об/мин. Затем сливают жидкую часть, а к осадку приливают 2—4 мл 1—3% раствора соляной кислоты для растворения хлопьев коагулянта.

Полученную смесь центрифугируют, удаляют жидкую часть, а осадок исследуют в дальнейшем по методике Романенко, применяемой для анализа почвы.
И. К. Падченко с соавторами (1982) разработал следующие методики исследования почвы, воды и сточных вод на яйца гельминтов.

Исследование почвы на яйца гельминтов. Отобранную пробу почвы (не менее 300 г) вносят в большую фаянсовую ступку, постепенно добавляют к ней 3% раствор натриевого или калиевого основания и тщательно растирают пестиком до образования гомогенной массы.

Полученную смесь выливают в стеклянный цилиндр емкостью 10 л, предварительно наполненный на 3/4 объема водопроводной водой, и отстаивают в течение 5 мин. Всплывшие на поверхности смеси плотные примеси удаляют петлей с сеткой.

После 5-минутного отстаивания надосадочную жидкость переливают сифоном в другой большой цилиндр, а образовавшийся осадок переносят в цилиндр емкостью 1 л и повторно отмывают водопроводной водой (не менее 2—3 раз).

Образующуюся при этом в малом цилиндре надосадочную жидкость каждый раз переливают сифоном после 5-минутного отстаивания в большой цилиндр, где она смешивается с жидкой частью смеси, полученной после первого 5-минутного отстаивания. К собранной в большом цилиндре жидкости добавляют один из коагулянтов (сернокислый алюминий, сернокислое железо и др.

) из расчета 0,3 г на 1 л жидкости и отстаивают ее 1—1,5 ч до полного просветления. Образовавшуюся надосадочную жидкость удаляют сифоном, а к осадку добавляют 1—3% раствор соляной кислоты для растворения хлопьев коагулянта. Полученную смесь отстаивают 18—24 ч, после чего жидкую часть удаляют сифоном, а осадок исследуют на яйца гельминтов.

С этой целью осадок тщательно встряхивают и пастеровской пипеткой наносят 1 каплю полученной взвеси на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. Исследуют не менее 1 мл осадка, а затем математически пересчитывают на весь его объем. При незначительном загрязнении проб почвы микроскопическому исследованию подлежит весь осадок.

Исследование сточной воды на яйца гельминтов. Пробы сточной воды, взятые на разных этапах ее очистки на очистных сооружениях, наливают в 10-литровые цилиндры и отстаивают 5 мин. Всплывшие на поверхность жидкости плотные примеси удаляют петлей.

После 5-минутного отстаивания надосадочную жидкость переливают сифоном в другой большой цилиндр, а осадок удаляют. Полученную жидкую часть сточной воды смешивают в большом цилиндре с коагулянтом и исследуют в дальнейшем по той же методике, что и почву (на этапе добавления коагулянта).

Пробы воды из водопроводной сети и различных водоемов смешивают в большом цилиндре с коагулянтом и исследуют в дальнейшем по той же методике, что и сточную воду.

Исследование осадков сточных вод на яйца гельминтов. Пробы осадков сточных вод отбирают с 5—10 мест по 100 мл, помещают в стеклянные сосуды объемом 1—2 л. Сухие осадки забирают по той же методике, что и почву.

Вносят 100—150 мл осадка в центрифужную пробирку объемом 250 мл, центрифугируют в течение 5 мин при 1000 об/мин. Затем жидкую часть сливают, а к осадку добавляют чистую воду до прежнего объема, тщательно размешивают и центрифугируют.

Такую промывку осадка повторяют 2—3 раза, после чего к нему добавляют 3—5 г чистого песка и полученную смесь исследуют по той нее методике, что и почву.

Согласно нашим данным, осадок сточных вод исследуют на яйца гельминтов по следующей методике: пробу осадка в количестве 1 л тщательно растирают пестиком в большой фаянсовой ступке, постепенно добавляя к нему 3% раствор натриевого или калиевого основания, а в дальнейшем исследуют по той же методике, что и почву.

Исследование смывов на яйца гельминтов. Объекты внешней среды, подлежащие исследованию, смывают ватными тампонами, смоченными в 1% растворе натриевого основания или в 20% растворе глицерина. Тампоны смывают в центрифужные пробирки 2—3% раствором гидрокарбоната натрия или 1% раствором натриевого основания и центрифугируют. Полученный осадок микроскопируют.

Определение жизнеспособности яиц и личинок гельминтов. Жизнеспособность яиц и личинок гельминтов по внешнему виду определяют при помощи витальных красителей, методов культивирования и постановки биопроб на лабораторных животных.

Под световым микроскопом у мертвых или дегенерирующих яиц гельминтов оболочки разорваны или деформированы, цитоплазма разрыхлена, мутная.

При подогревании зрелых яиц аскариды, власоглава, острицы до температуры +37° С личинки этих гельминтов проявляют активную подвижность.

Культивирование яиц и личинок гельминтов. Незрелые яйца аскариды культивируют при температуре +24…+30°С в чашках Петри (влажная камера) в 3% растворе формалина, приготовленном на 0,85% растворе натрия хлорида, а яйца власоглава — в 3% растворе хлористоводородной кислоты при температуре +30…+35°С, яйца остриц —в 0,85% растворе натрия хлорида при температуре Ч-37°С.

Чашки Петри 1—2 раза в неделю открывают для аэрации и увлажняют в них фильтровальную бумагу чистой водой. Развитие яиц контролируют 2 раза в неделю по наличию признаков деления протопласта на отдельные бластомеры. В первые дни яйцо развивается до 16 бластомеров, переходящих в стадию морулы (вторая стадия).

Если в течение 2—3 мес у янц не наблюдается признаков развития, их следует считать погибшими.

Источник: http://medpuls.net/guide/parasitology/sanitarno-gelmintologicheskie-issledovaniya

Метод исследования почвы на яйца гельминтов по Романенко Н. А. (1996)

Методы исследования почва на гельминтов

25 г почвы заливают раствором щелочи и центрифугируют,предварительно размешав.

Надосадочную жидкость сливают, а почву промывают водой. После промывки к почве добавляют 150 мл (45 мл в пробирки объемом 100 мл) насыщенного (плотность 1,38-1,40) раствора нитрата натрия, тщательно размешивают и центрифугируют.

Пробирки устанавливают в штатив, доливают тем же раствором соли до уровня на 2-3 мм ниже краев пробирок и накрывают предметными стеклами. Яйца гельминтов всплывают и концентрируются в поверхностной пленке насыщенного раствора.

Поэтому очень важно исключить какую – либо потерю ее.

Через 20-25 минут отстоя стекла снимают, переворачивая нижней поверхностью вверх, а на их место ставят другие . На предметные стекла наносят несколько капель 30%-ного раствора глицерина и накрывают их покровными стеклами, а затем микроскопируют.

2. На наличие личинок – по Берману – седиментация: в ситечко насып почву, вотом в стеклянную воронку с теплой водой,на конце которой пробирка,через сутки микроскопируют

3. Метод исследования почвы

на цисты кишечных простейших по Падченко И.К. (1992)

Ход исследования. Из объединенной пробы берут 25 г почвы, помещают в фаянсовую ступку, постепенно добавляют к ней водопроводную воду, тщательно растирают пестиком до гомогенной кашицы и выливают ее в цилиндр емкостью 1 л, предварительно наполненный на 3/4 объема чистой водой.

Смесь размешивают стеклянной палочкой и отстаивают в течение 15 минут. Образовавшуюся на поверхности смеси пленку удаляют петлей, а жидкую часть ее отсасывают сифоном в чистый цилиндр. Осадок повторно промывают (не менее 3 раз), собирая промывные воды в одном цилиндре.

Промывные воды отстаивают, через 24 часа надосадочную жидкость удаляют сифоном, а осадок исследуют в нативных мазках и окрашенных раствором Люголя препаратах.

С этой целью осадок тщательно встряхивают и одну каплю полученной взвеси наносят пастеровской пипеткой на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под световым микроскопом.

1. Метод исследования сточных вод на яйца гельминтов по Романенко Н. А. (1996)

Ход исследования. В каждую пробу сточных вод добавляют один из следующих коагулянтов: сульфат алюминия, сульфат железа, сульфат меди в дозе 0,5-0,6 г/л и тщательно размешивают. Полное осветление стоков наступает через 40-50 минут.

После слива надосадочной жидкости, осадок помещают (равномерно распределяя) в пробирки объемом 250 мл и центрифугируют в течение 3 минут при 1000 об/мин.

Воду сливают, а к осадку добавляют 2-4 мл 1-3% раствора соляной кислоты для растворения хлопьев коагулянта.

Смесь размешивают и центрифугируют, жидкость сливают, а осадок обрабатывают по методике Романенко для исследования почвы. Эффективность метода от 82 до 91%, в среднем – 86%.

6.2.2.2. Метод исследования сточной воды на цисты кишечных простейших по Падченко К.И. (1992)

Ход исследования. Пробы сточных вод отстаивают в течение 12-16 часов, затем надосадочную жидкость сливают, осадок переносят в центрифужные пробирки и центрифугируют 5 минут при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют, осадок переносят на предметное стекло, добавляют консервант и исследуют под световым микроскопом.

Жизнеспособные цисты кишечных простейших остаются в составе этих консервантов неокрашенными. Дегенерирующие цисты окрашиваются красителем в фиолетовый цвет.

Эффективность метода, в среднем – 90%.

2. цистицеркоз (cysticercosis) – зоонозное заболевание крупного рогатого скота и свиней, вызываемое личинками (финнами) цестод, паразитирующими в мышечной ткани животных.

Этиология. Цистицерки целлюлозные (Cysticercus cellulosae) поражают мышцы свиней, кабанов, диких кошек, собак и человека. Финны свиные являются личинками цестоды Taenia solium, паразитирующей в тонком отделе кишечника человека.

Эпизоотология. Источником распространения инвазионного начала и заражения цистицерками как крупного рогатого скота, так и свиней является человек – носитель половозрелых форм тений и выделяющий с фекалиями во внешнюю среду членики и яйца цестод.

Яйца цепней сохраняют жизнеспособность во внешней среде в течение нескольких месяцев. Животные заражаются, заглатывая яйца соответствующих цестод с водой и кормом.

Человек заражается тениидами при употреблении в пищу без соответствующей обработки мяса инвазированных животных.

Симптомы и течение. Течение хроническое. Клиническое проявление у животных не выражено. Животные остаются носителями цистицерков в течение жизни.

Диагноз устанавливается посмертно при обнаружении финн в мышцах, для чего делаются широкие разрезы сердечной, жевательной и других мышц.

Cysticercus cellulosae представляет собой полупрозрачный пузырек округлой или овальной формы, величиной от горошины до фасоли, содержит внутри сколекс с четырьмя присосками и двойным рядом крючьев.

Лечение животных не проводится.

Профилактика и меры борьбы. Профилактические мероприятия и борьба с цистицеркозами животных и тениидозами человека проводится комплексно ветеринарными и медицинскими службами.

3. Гнус и борьба с ним

Гнус – кровососущие двукрылые летающие насекомые, к которым относятся комары, мошки, мокрецы, слепни и некоторые кровососущие мухи.

Этиология.Комары семейства Culicidae включает более 2 тысяч видов, наиболее распространены комары родов Aedes, Culex, Anopheles. Cемейство мошек Simuliidae насчитывает более 900 видов, в Беларуси их около 35 видов.

В семействе мокрецов Cеratopogonidae наиболее распространены роды Culicoides, Zentoconops и Forcipomyia. На территории СНГ распространены более 196 видов слепней сем. Tabanidae. Нападают на животных и мухи-жигалки.

Эпизоотология. Нападают на животных и сосут кровь только самки двукрылых насекомых, а у мух-жигалок – и самцы, и самки. Комары – сумеречные кровососы, в жаркие дни мошки и мокрецы нападают утром и особенно вечером, слепни более активны в жаркую и душную погоду, нападают на животных в конце утра – начале дня.

Симптомы и течение. Укусы насекомых болезненны и сильно беспокоят животных. Слепни могут высосать 50-200 мг крови, комары – 3 мг, муха-жигалка сосет кровь животного 3-11 минут. При нападении гнуса теряется продуктивность, они являются переносчиками многих опасных болезней. У животных после укусов наблюдается аллергия, отеки, воспаление кожи, иногда повышение температуры.

Диагноз. Виды насекомых, нападающих на животных, определяют по особенностям строения тела.

Лечение. Для лечения животных при нападении гнуса против насекомых применяют репелленты и инсектициды. Больным животным проводят симптоматическое лечение с применением противоаллергических средств, сердечных, общеукрепляющих препаратов.

Меры борьбы и профилактики. Проводят общие и специальные мероприятия. Фермы, летние лагеря и загоны располагают вдали от заболоченных лесов, болот, на сухих хорошо продуваемых ветром участках.

Ограничивают выплод гнуса проведением мелиорации заболоченных участков, регулируют уровень воды в водоемах. Животных из заболоченных лесов, болот переводят на сухие, хорошо продуваемые ветром участки.

Выпасают животных в дневное время, а при нападении слепней – рано утром и вечером.

Для борьбы с гнусом применяют перметрин, неостомазан, протеид, бутокс, неоцидол, эктомин и др. препараты согласно наставлениям по их использованию.

При невозможности предупредить массовое нападение гнуса на животных их ставят на несколько дней на стойловое содержание.

25.)



Источник: https://infopedia.su/15xf897.html

Угроза распространения яиц гельминтов в почвах городских территорий

Методы исследования почва на гельминтов

Ерофеева В. В., Доронина Г. Н. Угроза распространения яиц гельминтов в почвах городских территорий // Молодой ученый. — 2017. — №22. — С. 222-225. — URL https://moluch.ru/archive/156/44045/ (дата обращения: 06.03.2020).



Эколого-эпидемическая оценка почв городских территорий на загрязнённость яйцами гельминтов является актуальной проблемой в Российской Федерации. Токсокароз имеет широкое распространение среди домашних и бездомных плотоядных животных по всему миру.

Щенки в возрасте до 1 месяца имеют 100 % зараженность гельминтами, у кошек наибольшая зараженность приходится на зрелый, репродуктивный возраст. В крупных городах и мегаполисах непрерывно возрастает численность плотоядных. Инвазированные животные загрязняют окружающую среду яйцами токсокар.

Исследования на обсемененность яйцами рода Toxocara показали, что самыми загрязненными территориями являются придомовые участки.

Ключевые слова: геогельминтозы, токсокароз, toxocara canis, toxocara cati собаки, кошки, почвы, инвазионные яйца гельминтов, заболевания человека, зоонозы

Геогельминтозы широко распространены, как в мире, так и на территории Российской Федерации. По оценкам ВОЗ в мире примерно 2 млрд. человек инвазированны геогельминтами.

В Российской Федерации ежегодно регистрируется около 30 тыс. случаев геогельминтозов.

В структуре геогельминтозов лидирующее положение занимает аскаридоз — 90 %, далее следует токсокароз — 9 % и трихоцефалез — 1 %, на долю другсих геогельминтозов приходится всего 0,1 %. [5, с.1–2]

В Российской Федерации ежегодно регистрируется не более 30 тыс. случаев геогельминтозов [1,7]. Так за 2015 год на территории Российской Федерации было зарегистрировано 26 828 случаев геогельминтозов.

В структуре геогельминтозов на территории нашего государства токсокароз находится на втором месте, после аскаридоза. На его долю приходится почти 9 %. Ежегодно выявляется до 5 тыс. случаев данного заболевания.

Количество зарегистрированных случаев токсокароза за период 2012–2015 гг. представлено на рисунке 1. [4, с. 1, 3; 5, с. 2, 3]

Рис. 1. Зарегистрированные случаи токсокароза в Российской Федерации за период 2012–2015 гг.

Наряду с тем, что, согласно статистическим данным о заболеваемости населения РФ токсокарозом, наблюдается тенденция к снижению случаев заболевания данным геогельминтозом; однако с каждым годом количество субъектов Российской Федерации, в которых регистрируются случаи токсокароза, увеличивается.

Из данных фактов следует, что на территории России в ряде субъектов РФ внедряются, а в ряде — улучшаются, методы диагностики токсокароза; снижение случаев токсокароза может свидетельствовать о санитарном просвещении населения относительно данного заболевания и проведении профилактических мероприятий, и как следствие, о соблюдении, как владельцами собак, так и остальным населением, правил гигиены.

Однако представленные статистические данные, не дают полного представления о степени заболеваемости населения РФ токсокарозом. Истинный уровень заболеваемости токсокарозом на территории Российской Федерации значительно выше.

Причиной тому может служить недостаточная информированность врачей, в первую очередь педиатров, об особенностях клинической картины заболевания и возможностях лабораторной диагностики данного заболевания.

Не редко токсокароз проходит под различными диагнозами, например, хроническая пневмония, аллергоз, дерматит и др. [2]

Несоответствие статистических данных реальной картине заболеваемости населения РФ, может быть следствием того, что в некоторых субъектах РФ в недостаточной степени отработана диагностика токсокароза. В данных субъектах РФ либо вовсе не зарегистрированы случаи токсокароза, либо выявлены единичные случаи, что не отражает фактической ситуации по данному заболеванию в регионе.

Для определения роли компонентов окружающей среды в распространении яиц гельминтов и попадании их в организм человека, для определения степени обсемененности и загрязненности окружающей природной среды, для выбора и разработки профилактических мероприятий проводят анализы почвы, снежного покрова, воды и т. д.

В руководстве «Методы санитарно-паразитологических исследований [6]. Методические указания» приведено пошаговое описание проведения исследования почвы по методу Романенко. По данному методу исследование почвы на яйца гельминтов проводится следующим образом: [3]

Для исследования используют 100 г (4 порции по 25 г) почвы объединенной пробы. Порции почвы помещают в центрифужные пробирки, объем которых составлял 250 мл, и затем к почве добавляют 3 % раствор NaOH в соотношении 1:1. Содержимое пробирок перемешивается и отстаивается 25–30 мин.

Затем пробирки помещают в центрифугу и центрифугируют в течении 5 мин при 800 об/мин. Образовавшуюся надосадочную жидкость сливают, а почву промывают водой 2–5 раз. Промывку осуществляют до тех пор, пока надосадочная жидкость не станет чистой, также при каждой промывке осадок тщательно перемешивают.

После промывки к осадку добавляется 150 мл насыщенного раствора NaNO3 — для обнаружения яиц власоглава и аскариды, или 150 мл смеси насыщенного раствора ZnSO4 с 5 % раствором KIO3 — для обнаружения яиц токсокар. Почву тщательно перемешивают и повторно центрифугируют.

После чего в каждую пробирку добавляют насыщенный раствор NaNO3, уровень раствора при этом не должен достигать 2–3 мм до краев пробирки. Затем пробирки устанавливают в штатив и накрывают предметными стеклами.

За счет более низкой плотности, чем плотность раствора, яйца гельминтов всплывают, концентрируясь в поверхностной пленке раствора.

Приподнимая предметное стекло не более чем на 10 мм, в пробирки добавляют насыщенный солевой раствор, в количестве, при котором обеспечивается его соприкосновение с нижней стороной предметного стекла. После 25 мин отстаивания предметные стекла заменяются (2–3 раза).

На стекла с поверхностной пленкой наносятся 1–3 капли 30 % раствора глицерина, а затем на них накладываются тонкие покровные стекла. Полученные микропрепараты изучаются под микроскопом при увеличении в 80 раз.

Оценка результатов. Для получения показателя содержания количества яиц в 1 кг почвы совокупность обнаруженных яиц гельминтов в 100 г почвы умножается на 10.

Отбор проб почв для исследований на обсемененность яйцами токсокар производился на территории г. Красногорск в период с августа 2016г по март 2017 г. Отбор проб почв производился с территорий детских игровых площадок (песочницы и территория рядом с ними), парков, придомовых территорий в соответствии с методами санитарно-паразитологических исследований.

Наибольшее количество положительных проб было установлено при исследовании проб почв, отобранных с придомовых территорий. Из 50 отобранных проб почвы данной зоны положительными на наличие яиц токсокар оказались 10.

В целом было обнаружено 14 яиц рода Toxocara. В соответствии с санитарно-паразитологическими показателями, предъявляемыми к качеству почв, почвы данной территории относятся к категории «умеренно опасные», т. к.

показатель обсемененности 6 экз./кг.

В целях недопущения заражения домашних животных (собак и кошек) следует:

‒ соблюдать правила гигиены (регулярно мыть питомца после прогулки);

‒ давать антгельминтные и препараты (в особенности сукам и щенкам);

‒ регулярно мыть обувь после улицы (во избежание поедания питомцами потенциально контаминированной почвы).

‒ соблюдать правила личной гигиены (в особенности детьми или после земляных работ);

‒ ограничить и исключить общение маленьких детей с собаками и щенками, соответственно;

‒ избегать купания на несанкционированных (диких) пляжах;

‒ проводить плановую уборку жилых помещений с применением дезинфектантов.

Обеспечение и поддержание чистоты и безопасности городской среды может быть достигнуто исключительно при совместной работе и участии территориальных органов местного самоуправления, территориальных центров госсанэпиднадзора, жилищно-эксплуатационных организации и населения. С учетом, всего вышесказанного, основными профилактическими мероприятиями, в силу их эффективности или доступности, следует выделить:

‒ экологическое просвещение и воспитание населения (просветительская работа в образовательных и медицинских учреждениях, установка информационных стендов на территории рекреационных зон; уборка фекалий за своим питомцем);

‒ организация специальных площадок для выгула собак;

‒ ограждение детских и рекреационных зон, исключающее доступ к ним животных;

‒ регулярная дегельминтизация домашних животных;

‒ соблюдения правил гигиены;

‒ плановая дератизация и дезинсекция жилых зданий;

‒ контроль численности бездомных собак и кошек (отлов и стерилизация);

Токсокароз является насущной и актуальной проблемой во всем мире, в том числе и в России. Несмотря на широкое распространение данного зоонозного паразитоза, зачастую ему уделяется недостаточно внимания. В структуре геогельминтозов Российской Федерации токсокароз занимает второе место.

На территории России ежегодно регистрируется до 5 тыс. случаев токсокароза. На фоне наблюдаемой тенденции к снижению случаев токсокароза в стране, установлен рост количества субъектов РФ, в которых данный паразитоз регистрируется.

Что свидетельствует о внедрении и улучшении методов диагностики токсокароза, а также о санитарном просвещении населения касательно данного заболевания. Тем не менее, уровень заболеваемости токсокарозом в действительности значительно выше, ввиду некоторых особенностей самого паразита и трудности диагностирования заболевания.

По причине того, что токсокароз у человека проявляется полиморфными клиническими проявлениями, его проявления схожи с симптомами дерматита и др.

Литература:

  1. Медицина: вызовы сегодняшнего дня: материалы II Mеждунар. науч. конф. (г. Москва, декабрь 2013 г.). — М.: Буки-Веди, 2013. — iv, 80 с.

Источник: https://moluch.ru/archive/156/44045/

ЭффектЛечения
Добавить комментарий